رنگ تریپان بلو، Trypan blue برای بررسی زنده مانی سلول ها

تریپان بلو یک رنگ آزو است که از تولویدین مشتق شده است. این ماده در آب محلول است و دارای وزن مولکولی 961 گرم در مول است. تریپان بلو، یک رنگ اسیدی آبی‌رنگ، آب‌دوست است که به‌طور گسترده‌ای برای ارزیابی قابلیت زنده ماندن سلول‌ها استفاده می‌شود.

به‌عنوان یک روش آسان برای تعیین سلول‌های زنده، تریپان بلو سلول‌های مرده با غشاهای نفوذپذیر را آبی‌رنگ می‌کند، درحالی‌که توسط بسیاری از سلول‌های زنده و غشاهای نامنظم آن‌ها بیرون نگه‌داشته می‌شود و بدین‌صورت سلول‌های زنده نسبت به سلول‌های مرده را مشخص می‌شوند.

اگرچه تریپان بلو عمدتاً برای ارزیابی زنده‌مانی سلول‌های کشت‌شده مورداستفاده قرار می‌گیرد، کاربردهای دیگری نیز دارد. Direct blue 14 در تعیین زنده‌مانی بخش‌های شکم موش و خوشه سلولی نمونه‌های پانکراس کبدی بز مورداستفاده قرارگرفته است. در آزمایش Trypan Blue، یک سوسپانسیون سلولی به‌سادگی با تریپان بلو مخلوط شده و سپس به‌صورت چشمی بررسی می‌شود تا مشخص شود که سلول‌ها رنگ را جذب یا حذف می‌کنند.

در پروتکل ارائه‌شده، یک سلول زنده دارای سیتوپلاسمی روشن است درحالی‌که یک سلول غیرزنده سیتوپلاسم آبی دارد.

از این مادی بیولوژی برای از بین بردن مثبت کاذب در شمارش سلول با فلوسایتومتری استفاده می‌شود. نانو ذرات سیلیکای مزپوروس (MSN) نشان‌دار شده با فلورسئین (FITC) می‌تواند به داخل سلول وارد یا به خارج غشای سلولی جذب شوند. هنگامی‌که این دو رخداد اتفاق می‌افتد، اغلب دشوار است که بین آن‌ها با فلوسایتومتری تمایز قائل شویم.

با اضافه کردن تریپان بلو به محلول، مواد FITC-MSN خارج سلولی خاموش می‌شوند و بدین ترتیب شمارش نمی‌شوند. تنها سلول‌های زنده‌ای که FITC-MSN را در درون خوددارند پاسخ مثبت را گزارش می‌دهند. تریپان آبی نمی‌تواند به غشاء سلول‌های زنده نفوذ کند، تمام فلورسانس مربوط به MSN جذب‌شده روی غشاء سلول را خاموش می‌کند؛

بنابراین، با استفاده از تریپان فلورسانس تشخیص داده‌شده توسط فلوسایتومتری مربوط به سلول‌های با MSN داخلی و یا اتوفلورسانس سلولی می‌شود. غلظت محلول تریپان بلو در این آزمایش معمولاً 0.4 % (w/w) است.

کاربرد

تریپان بلو گرید کشت سلول در موارد زیر استفاده شده است:

• در روش بررسی زنده‌مانی سلول
• برای تعیین تعداد سلول‌های زنده و نکروز از طریق رنگ‌آمیزی با محلول آبی 0.2 درصد تریپان بلو
• برای رنگ‌آمیزی بافت گیاهی به‌منظور مشاهده و بررسی مرگ سلولی

عملکرد بیوشیمیایی و فیزیولوژیکی

تریپان بلو برای بررسی سلول‌های زنده و دچار مرگ بر اساس توانایی سلول در جذب یا حذف رنگ استفاده می‌شود. یک سلول زنده دارای غشای سلولی دست‌نخورده است و بنابراین این رنگ را حذف می‌کند و سیتوپلاسم شفاف به نظر می‌رسد. در حالی سلول‌های مرده سیتوپلاسم آبی ‌رنگ را نشان می‌دهند.

دمای نگه‌داری

دمای اتاق