محصولات مرتبط
پودر سوبسترا DAB (دی آمينو بنزيدين) جهت رنگ آمیزی ايمونوهیستوشیمی و وسترن بلات
رنگ های Hoechst بخشی از خانواده رنگ های فلورسنت آبی است که برای رنگ آمیزی DNA استفاده می شود. این Bis-benzimides ها در اصل توسط Hoechst AG تولید شده اند، که تمام ترکیبات آن ها را شماره گذاری کرده است. به طوری که رنگ Hoechst 33342، 33342 ترکیب ساخته شده توسط این شرکت است. سه رنگ مربوط به Hoechst وجود دارد: Hoechst 33258، Hoechst 33342 و Hoechst 34580. رنگ های Hoechst 33258 و Hoechst 33342 بیشترین مواردی هستند که از آن ها استفاده می شوند و دارای طیف های تهییج – انتشار هستند.
خواص مولکولی
هر دو رنگ با نور ماورابنفش در حدود 350 نانومتر تحریک می شود و هر دو در حدود حداکثر طیف انتشار 461 نانومتر نور فلورسنت آبی را ساطع می کنند. رنگ متصل نشده حداکثر میزان انتشار فلورسانس خود را در محدوده 510 – 541 نانومتر دارد. رنگ های Hoechst می توانند با لامپ زنون یا جیوه ای یا لیزر ماورا بنفش تهییج شوند. شدت فلورسانس رنگ های Hoechst نیز با pH حلال افزایش می یابد.
رنگ های Hoechst در آب و حلال های آلی مانند دی متیل فرمامید یا دی متیل سولفوکسید حل می شوند. غلظت آن می تواند حداکثر به 10 میلی گرم در میلی لیتر برسد. محلول های حل شده در آب، در صورت محافظت در برابر نور، حداقل برای شش ماه در دمای 2-6 درجه سانتیگراد پایدار هستند. برای ذخیره سازی طولانی مدت، محلول ها در عوض در دمای منفی 20 درجه سانتیگراد یا کمتر منجمد می شوند.
رنگ ها به شیار کوچک DNA دو رشته ای اتصال می یابند و به توالی غنی از آدنین و تیمین متصل می شوند. اگرچه رنگ ها می توانند به تمام اسیدهای نوکلئیک متصل شوند، رشته های DNA دو رشته ای غنی از AT باعث افزایش چشمگیر فلورسانس می شوند. رنگ های Hoechst دارای قابلیت نفوذپذیری در سلول هستند و می توانند در سلول های زنده یا فیکس شده نفوذ کرده و به DNA آن ها متصل شوند.
کاربرد
غلظت 0.1–12 μg/ml معمولاً برای رنگ آمیزی DNA در باکتری ها یا سلول های یوکاریوتی استفاده می شود. سلول ها به مدت 30-1 دقیقه در دمای اتاق یا 37 درجه سانتیگراد رنگ آمیزی می شوند و سپس برای از بین بردن رنگ های متصل نشده شست و شو داده می شوند. اگر نمونه ها با مقدار زیادی رنگ شست و شو داده شوند، یک فلورسانس سبز ناشی از رنگ های متصل نشده ممکن است مشاهده شود. این ماده رنگی، اغلب به عنوان جایگزین رنگ های دیگر اسید نوکلئیک مانند DAPI استفاده می شود.
تفاوت های کلیدی بین رنگ های Hoechst و DAPI عبارتند از:
- رنگ های Hoechst به اندازه DAPI سمی نیستند، که زنده ماندن بالاتر سلول های رنگ آمیزی شده را تضمین می کند.
- گروه اتیل اضافی در رنگ های Hoechst باعث نفوذ پذیری بیشتر در سلول ها می شود.
- رنگ های مخصوص رنگ آمیزی هسته وجود دارد که باعث زنده ماندن سلول ها پس از رنگ آمیزی می شود.
DESCRIPTION
Application
bisBenzimide H 33258 is useful for staining DNA, chromosomes and nuclei. bisBenzimide H 33258 may be used for fluorescence microscopy or flow cytometry
Excitation max. = 346 nm
Emission max. = 460 nm
A bibenzimidazole dye that has been utilized as a fluorescent stain. It is membrane-permeable and selectively binds to adenine-thymine regions in the minor groove of B-form DNA with a high binding constant, making it a useful stain for DNA, chromosomes, and nuclei . It has been shown that the fluorescence is relatively insensitive to the presence of various solution reagents (i.e., BSA, RNA, Tris, sucrose, TEA/EDTA, Triton X-100, and SDS). Furthermore, the solution ionic strength and pH has been shown to be independent of the Stokes′ shift of bisBenzimide H 33258 . The properties of this dye make it useful in several applications such as detecting mycoplasma contamination in tissue culture , indicating early onset of apoptosis, sorting living cells based on DNA content, and acting as a probe for DNA-Drug interactions. Utilized in the design and development of a fluorimetric assay to quantitate cell numbers in microtiter plates. The methodology of the assay is based on Hoechst 33258 binding to DNA and is sensitive for a thousand cells. One application of this is assay is the normalization of ELISA data. The illumination of Hoechst 33253 coupled with Merocyanine 540 can be utilized as an effective method to eradicate bacterial infections (i.e., A. laidlawii contaminated corneal endothelial cell cultures) . BisBenzimide H 33258 is commonly used in many established staining protocols
Biochem/physiol Actions
bisBenzimide H 33258 is a potent and selective Bcl-XL inhibitor. bisBenzimide H 33258 is a membrane-permeable, fluorescent DNA stain with low cytotoxicity that intercalate in A-T regions of DNA
Other Notes
Useful reagent for cytogenetic studies; for the fluorescent staining of DNA in cells; simple two-step fluorimetric assay of DNA in isolated nuclei, cell extracts, or crude homogenates using Hoechst 33258
دیدگاه خود را بنویسید