دی آمینو بنزیدین (DAB) یک سوبسترای کروموژنیک برای آنزیم پراکسیداز (HRP) که به عنوان یک ماده رنگ آمیزی در تکنیک‌های ایمونوهیستولوژیک و ایمونوبلاتینگ استفاده می‌شود. DAB یک ماده شیمیایی با فرمول مولکولی C12H14N4 و وزن مولکولی 214.27 g/mol است که با نام‌های 3,3′,4,4′-Tetraaminobiphenyl, 3,3′,4,4′-Biphenyltetramine, و 3,3′-Diaminobenzidine نیز شناخته می‌شود.
محصولات مرتبط
پودر سوبسترا DAB (دی آمينو بنزيدين) جهت رنگ آمیزی ايمونوهیستوشیمی و وسترن بلات
3،′3-دی‌آمینوبنزیدین تتراهیدروکلراید هیدرات یا پودر سوبسترا DAB ماده‌ای توکسیک بوده و یکی از رنگ‌های پر کاربرد در ایمونوهیستوشیمی می باشد. این ماده در رنگ‌آمیزی اسیدهای نوکلئیک و پروتئین‌ها و برای توليد رنگ نامحلول در واکنش با آنزیم HRP در ایمونوهيستوشيمی، وسترن بلات، دات بلات و… استفاده می شود.
پودر سوبسترا DAB در واکنش با انزیم پراکسیداز، به‌عنوان یک اهداکننده هیدروژن در حضور پراکسید عمل می‌کند، اکسید شده و یک محصول نهایی قهوه‌ای رنگ و نامحلول را تولید می‌کند. اکسیداسیون DAB را می‌توان از نظر اسپکتروفتومتری به‌عنوان یک سوسپانسیون کلوئیدی شفاف در ژلاتین با سرعت 465 نانومتر اندازه‌گیری کرد.
کاربرد
- 3،′3-دی‌آمینوبنزیدین تتراهیدروکلراید هیدرات یا پودر سوبسترا DAB در موارد زیر استفاده شده است:
- در روش رنگ‌آمیزی ایمونوهیستولوژیک و FISH (fluorescence in situ hybridization)
- به‌عنوان یک سوبسترای کروموژنیک برای آﻧﺰﻳﻢ ﭘﺮاﻛﺴﻴﺪاز در روش وسترن بلات و ایمونوهیستوشیمی
- DAB برای رنگ‌آمیزی و تشخیص اکسیداتیو میتوکندری استفاده شده است.
نکات تکمیلی
- این محصول یک رسوب قهوه‌ای با پراکسیداز برای استفاده در روش‌های رنگ‌آمیزی ایمونوهیستولوژیک و ایمونوبلات تولید می‌کند.
- برای روش‌های ELISA (میکروول) توصیه نمی‌شود.
- حداقل یک سال در دمای 2-8 درجه سانتیگراد پایدار است.
- این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی در نظر گرفته شده است.
- محصول نهایی در برابر الکل مقاوم بوده بنابراین می‌توان از انواع ضد لکه‌ها و محیط‌های نصب با مایع DAB استفاده کرد.
- مایع DAB تمام محلول‌های کروموژن و بافر پراکسید موردنیاز برای تولید یک محلول بستر سریع و راحت DAB را فراهم می‌کند.
رنگ‌آمیزی ایمونوهیستولوژیک و وسترن بلاتینگ با پودر سوبسترای DAB :
• 10 میلی‌گرم از پودر 3،′3-دی‌آمینوبنزیدین تتراهیدروکلراید هیدرات را در 15 میلی‌لیتر بافر تریس بافر سالین TBS حل کنید.
• قبل از استفاده 12 میکرولیتر محلول تازه پراکسید هیدروژن 30% اضافه کنید. ممکن است محلول سوبسترا بلافاصله قبل از استفاده در صورت لزوم از طریق فیلتر 0.2 میکرومتر فیلتر شود.
غلظت DAB و پراکسید و همچنین ترکیب بافر را می توان به‌منظور بهینه‌سازی آزمایش‌های مختلف تغییر داد.
نگهداری و پایداری :
پودر 3،′3-دی‌آمینوبنزیدین تتراهیدروکلراید در دمای 20- درجه سانتیگراد، دور از نور و رطوبت نگهداری شود. دی‌آمینوبنزیدین تتراهیدروکلراید با غلظت 10 میلی‌گرم در میلی‌لیتر در آب محلول است. محلول DAB باید بلافاصله قبل از استفاده برای رسیدن به بهترین نتیجه استفاده شوند. در موارد ضروری، محلول‌ها را می‌توان در یخچال و دور از نور تا 16 ساعت نگهداری کرد. ذخیره محلول‌ها به مدت یک اورنایت کارآیی محصول را کاهش می‌دهد. مطالعات نشان داده است محلول DAB با غلظت 0.6 میلی‌گرم در میلی‌لیتر در بافر تریس با pH 7.6 برای چند هفته در 4 درجه سانتیگراد پایدار است. 
دیدگاه خود را بنویسید