نیتروسلولز یکی از نخستین غشاهایی است که برای وسترن بلاتینگ استفاده شده است، برای ساخت این غشا لایه ای از سلولز در مجاورت لایه نازکی اسید نیتریک استریفیه می شود و سپس در حلال آلی حل می شود. اتصال پروتئین به این غشا سریع، تقریبا غیر قابل برگشت و به مقدار 80 تا 100 میگروگرم در سانتی متر مربع می باشد. نیتروسلولز به سادگی در اب یا بافر ترانسفر مرطوب گردیده و با طیف گسترده ای از سیستم های شناسایی پروتئین سازگار می باشد، یکی از معایب غشای نیتروسلولز عدم اتصال کووالان مولکول های پروتئینی به ان می باشد، بطوریکه این امر سبب عبور پروتئین های کوچک از میان غشا گردیده و در نتیجه بخش کوچکی از مقدار حقیقی این مولکول ها به غشا متصل باقی می ماند، از دیگر معایب غشای نیتروسلولز ان است که در صورت خشک شدن بسیار شکننده می گردد.
محصولات مرتبط
غشا نیتروسلولز (غشاء ترانسفر خالص از جنس نیتروسلولز) که پرمصرف‌ترین غشاء برای انتقال پروتئین‌ها و اسیدهای نوکلئیک است. غشاء نیتروسلولز (CN) آنها از نیترات سلولز و استات سلولز (CA) تشکیل شده و دارای اتصال و حساسیت بالا تا بک‌گراند آزمایش کاهش را کاهش دهد. فیلترهای غشایی نیتروسلولزی با ظرفیت اتصال بالا، انتخاب خوبی برای تشخیص اسید نوکلئیک در کاربردهای تحقیق و توسعه هستند.
ویژگی غشا نیتروسلولز
- حساسیت بالا
- وضوح‌بالا
- پس‌زمینه کم
- مناسب برای سیستم‌های لیبلینگ و تشخیص (کمولومینسانس، فلورسانس، رنگ‌سنجی و رادیواکتیو)
- توانایی بی‌حرکت کردن پروتئین‌ها، گلیکوپروتئین‌ها یا اسیدهای نوکلئیک، در بلاتینگ پروتئین
- قابلیت اتصال به پروتئین (حفظ بالای پروتئین حتی پس از مراحل شستشوی متوالی)
کاربرد غشا نیتروسلولز
- غشا الکتروفوز (انتقال پروتئین از ژل SDS-PAGE به غشا)
- غشا مناسب برای نوترن بلات، وسترن و ساترن بلاتینگ
- ایمونوبلاتینگ پروتئین‌های هدف
- بی‌حرکت نمودن پروتئین‌ها در میکروسکوپ نیروی اتمی
- در آزمایش‌های تشخیصی که اتصال آنتی‌ژن و آنتی‌بادی اتفاق می‌افتد (آزمایشات بارداری، آزمایش‌های U- آلبومین و CRP)
مقایسه غشاهای PVDF و نیتروسلولز
- غشا نیتروسلولز دارای ظرفیت اتصال پروتئین کمتری از PVDF می باشد بنابراین حساسیت کمتری برای پروتئین‌هایی با فراوانی کم ایجاد می‌کند.
- غشاهای PVDF از استحکام مکانیکی بالاتری نسبت به غشاهای NC برخوردار است بنابراین برای کاربردهای وسترن‌بلات که در آن نیاز به استریپینگ و ریپروبینگ می‌باشد، مناسب‌تر هستند.
نکات تکمیلی
- غشاء های نیتروسلولز برای استفاده مجدد توصیه نمی‌شود،
- حضور متانول در بافر انتقال، اتصال پروتئین به غشاهای نیتروسلولز را بهبود می‌بخشد.
- این محصول با اندازه منافذ 0.45 میکرومتر برای پپتیدها و پروتئین‌های با وزن مولکولی 400-13 کیلو دالتون توصیه شده است.
- در هنگام خشک‌شدن شکننده بوده و کنترل آن دشوار است.
Nitrocellulose Blotting Membranes
GE Healthcare offers a Western blotting nitrocellulose membrane family composed of high-quality 100% pure nitrocellulose membranes based on the legacy of Schleicher & Schuell
The rolls, sheets, discs, and sandwiches are available in up to three pore sizes with high surface area and uniformity
The nitrocellulose membranes have high binding properties for Western blot, dot-blot assays
and other protein or nucleic acid methods
Special formats have been developed for stripping and/or reprobing purposes
Amersham Protran 0.45 NC
Nitrocellulose membrane, with a 0.45 µm pore size, is suitable for proteins of a wide range of molecular weights
Low background and excellent signal-to-noise ratios
Compatible with a variety of labeling and detection systems
High binding capacity
Suitable for proteins of a wide range of molecular weights
Proprietary nitrocellulose formula gives a long shelf life of bound proteins
Available in popular precut sizes for your application
Amersham Protran offers excellent sensitivity, resolution, and low background
especially when used with Amersham ECL, Amersham ECL Prime, or Amersham ECL Select Western Blotting Systems
دیدگاه خود را بنویسید