نیتروسلولز یکی از نخستین غشاهایی است که برای وسترن بلاتینگ استفاده شده است، برای ساخت این غشا لایه ای از سلولز در مجاورت لایه نازکی اسید نیتریک استریفیه می شود و سپس در حلال آلی حل می شود. اتصال پروتئین به این غشا سریع، تقریبا غیر قابل برگشت و به مقدار 80 تا 100 میگروگرم در سانتی متر مربع می باشد. نیتروسلولز به سادگی در اب یا بافر ترانسفر مرطوب گردیده و با طیف گسترده ای از سیستم های شناسایی پروتئین سازگار می باشد، یکی از معایب غشای نیتروسلولز عدم اتصال کووالان مولکول های پروتئینی به ان می باشد، بطوریکه این امر سبب عبور پروتئین های کوچک از میان غشا گردیده و در نتیجه بخش کوچکی از مقدار حقیقی این مولکول ها به غشا متصل باقی می ماند، از دیگر معایب غشای نیتروسلولز ان است که در صورت خشک شدن بسیار شکننده می گردد.
محصولات مرتبط
غشا نیتروسلولز (غشاء ترانسفر خالص از جنس نیتروسلولز) که پرمصرف‌ترین غشاء برای انتقال پروتئین‌ها و اسیدهای نوکلئیک است. غشاء نیتروسلولز (CN) آنها از نیترات سلولز و استات سلولز (CA) تشکیل شده و دارای اتصال و حساسیت بالا تا بک‌گراند آزمایش کاهش را کاهش دهد. فیلترهای غشایی نیتروسلولزی با ظرفیت اتصال بالا، انتخاب خوبی برای تشخیص اسید نوکلئیک در کاربردهای تحقیق و توسعه هستند.
ویژگی غشا نیتروسلولز
- حساسیت بالا
- وضوح‌بالا
- پس‌زمینه کم
- مناسب برای سیستم‌های لیبلینگ و تشخیص (کمولومینسانس، فلورسانس، رنگ‌سنجی و رادیواکتیو)
- توانایی بی‌حرکت کردن پروتئین‌ها، گلیکوپروتئین‌ها یا اسیدهای نوکلئیک، در بلاتینگ پروتئین
- قابلیت اتصال به پروتئین (حفظ بالای پروتئین حتی پس از مراحل شستشوی متوالی)
کاربرد غشا نیتروسلولز
- غشا الکتروفوز (انتقال پروتئین از ژل SDS-PAGE به غشا)
- غشا مناسب برای نوترن بلات، وسترن و ساترن بلاتینگ
- ایمونوبلاتینگ پروتئین‌های هدف
- بی‌حرکت نمودن پروتئین‌ها در میکروسکوپ نیروی اتمی
- در آزمایش‌های تشخیصی که اتصال آنتی‌ژن و آنتی‌بادی اتفاق می‌افتد (آزمایشات بارداری، آزمایش‌های U- آلبومین و CRP)
مقایسه غشاهای PVDF و نیتروسلولز
- غشا نیتروسلولز دارای ظرفیت اتصال پروتئین کمتری از PVDF می باشد بنابراین حساسیت کمتری برای پروتئین‌هایی با فراوانی کم ایجاد می‌کند.
- غشاهای PVDF از استحکام مکانیکی بالاتری نسبت به غشاهای NC برخوردار است بنابراین برای کاربردهای وسترن‌بلات که در آن نیاز به استریپینگ و ریپروبینگ می‌باشد، مناسب‌تر هستند.
نکات تکمیلی
- غشاء های نیتروسلولز برای استفاده مجدد توصیه نمی‌شود،
- حضور متانول در بافر انتقال، اتصال پروتئین به غشاهای نیتروسلولز را بهبود می‌بخشد.
- این محصول با اندازه منافذ 0.22 میکرومتر برای پپتیدها و پروتئین‌های کوچک با وزن مولکولی کمتر از 20 کیلو دالتون توصیه شده است.
- در هنگام خشک‌شدن شکننده بوده و کنترل آن دشوار است.
DESCRIPTION
General description
Amersham™ Protran® Western blotting membranes, nitrocellulose with a 0.2 μm pore size, offer low background and excellent signal-to-noise ratios for blotting protocols
Versatile nitrocellulose membrane, provides excellent binding affinity for small proteins and peptides, as well as nucleic acids
Application
Amersham™ Protran® Western blotting membranes, nitrocellulose is suitable for use in
Western blotting
Southern blotting
Northern blotting
Features and Benefits
Offers excellent signal-to-noise ratios, without the need for rigorous washing conditions
Compatible with various western blot labeling and detection systems
Decreased risk of “blow-through” by the high binding capacity of small proteins (< Mr 20 000)
Designed to detect chemiluminescence and fluorescence.
Proteins bound to the transfer membrane have a long shelf life
Precut sizes are available for western blot transfer applications
Provides excellent sensitivity, resolution, and low background specifically when used with Amersham™ ECL™, Amersham™ ECL™ prime, or Amersham™ ECL™ select western blotting detection reagents
Legal Information
Amersham is a trademark of Cytiva
ECL is a trademark of Cytiva
Protran is a registered trademark of Cytiva
دیدگاه خود را بنویسید